j. jprot. 2021.104281

一个和Chen教授团队合作的案例在《Journal of Proteomics》上发表了,这篇论文给鸭肠炎病毒感染的致病机制带来了新的见解。这个研究采用了互作蛋白质组学的方法,目标是揭示这个病毒是怎么搞破坏的。研究用的是DEY病毒,它可是会在水禽里头引发致命性传染病的狠角色。在之前的工作中,他们把荧光蛋白C-mRFP给接在了DEY病毒糖蛋白C的末端,造了个带标记的rgCRFP病毒出来。这一回他们又用上了同样的荧光融合蛋白作为探针,搭配上商业抗RFP抗体去抓CEF细胞里的蛋白。 通过对CEF细胞进行免疫共沉淀和质谱分析,他们一共抓到了21个和DEY的GC蛋白扯到一起的宿主蛋白。为了证实这些互动是不是真的靠谱,他们还用了膜结合裂解泛素酵母双杂交系统(MbYTH)和双分子荧光互补(BIFC)做了验证。结果发现,GNG2、AR1H1、PPP2CA、UBE2I、MCM5、NUBP1和HN1这7种宿主蛋白确实和DEY的GC蛋白粘在了一块儿。 这个研究还利用Co-IP结合质谱技术把GC蛋白和宿主蛋白的互相作用网络给画了出来。他们用RFP标签从rgCRFP感染的CEF裂解物里把GC相关的宿主因子都给拉出来纯化了一遍。LC-MS/MS分析显示,总共鉴定出14284个多肽和2800个蛋白质。经过三次重复实验后,有21种细胞蛋白被确认为是和GC互动的重要角色。 Chen教授他们做的这个研究就是通过对DEV感染的CEF细胞进行深入分析来推进对这个病毒感染和致病机制的认识。DOI号码是10.1016/j.jprot.2021.104281。文章是在2021年第245期发表的。