AAV的转染效率一直不高，很大程度上是因为人体内有中和抗体在捣乱，这怎么办？其实AAV这个病毒载体特别好，它组织专一性强、扩散能力也好，免疫原性又低，安全性和稳定性都很高，科研和基因治疗里大家都很看好它。目前最常用的是2型和9型AAV，已经用到了临床上。比如Spark Therapeutics用AAV2做的Luxturna治疗Leber先天性黑蒙2型，诺华用AAV9做的Zolgensma治疗脊髓性肌萎缩症，都已经获批了。不过问题是，大多数人或者动物的血液里都有抗AAV衣壳的中和抗体。要是这些抗体被激活了，它们就会像路障一样拦住AAV进入靶细胞，导致基因表达不出来，治疗效果自然就变差了。之前有实验显示，哪怕滴度只有17:1这么低的NAbs，也能把2*10^12 vg/kg这么多的病毒全部拦住。在小鼠和猴子身上做的实验也证明了，1:5滴度的NAbs就能把肝脏里的转导完全阻断。这说明体内原来存的这些抗体严重限制了AAV的应用。为了提高治疗效果，我们得先给受试者或动物测一下体内有没有抗AAV的中和抗体。维真生物现在就能给大家提供检测服务，帮大家挑合适的动物模型和血清型。具体操作可以用荧光素酶报告系统来测，通过Luciferase发光值RLU来算抗体的活性。如果受试样品里有大量中和抗体，说明要用很大剂量才能有效转导基因，这种血清型就不适合这只动物了，得换个血清型或者模型再试试。数据支持把样品按30倍、60倍、120倍、240倍、480倍、960倍稀释下来测试。每个梯度取10微升分别和10微升不同血清型的AAV混合孵育24小时后感染293T细胞，再用酶标仪测RLU值。结果显示在血清1:60稀释的时候，不管是AAV2还是AAV9的抑制率都能接近100%。所以说检测这些中和抗体很关键啊。